液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)HPLC-MS/MS
利用LC-ESI-MS/MS蛋白鑒定技術(shù)對(duì)膠條樣本(即SDS-PAGE樣本)、IP、co-IP、Pull-down等純化溶液中等復(fù)雜樣本進(jìn)行蛋白鑒定。
技術(shù)原理
HPLC-MS/MS又叫高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),它以液相色譜作為分離技術(shù),質(zhì)譜作為檢測(cè)系統(tǒng)。樣品在質(zhì)譜部分和流動(dòng)相分離,被離子化后經(jīng)過質(zhì)譜儀質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開,經(jīng)檢測(cè)器的到質(zhì)譜圖,液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ),將色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力,與MS具有高選擇性、高靈敏性及能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)果信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來,在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域的到了廣泛的應(yīng)用。
技術(shù)路線
儀器類型
Thermo-Scientific Q Exactive
應(yīng)用范圍
相互作用蛋白復(fù)合體或多肽的鑒定
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
適合復(fù)雜樣品的蛋白鑒定,如相互作用洗脫的蛋白混合液、膠條等
周期短,通量高
樣品要求
1.雙向凝膠膠點(diǎn):考染、銀染(質(zhì)譜兼容)點(diǎn)清晰可見
2.SDS-PAGE條帶:考染、銀染(質(zhì)譜兼容)點(diǎn)清晰可見
3.蛋白質(zhì)溶液:蛋白總量>5μg,濃度>0.1μg/ul,緩沖液不含去污劑SDS、NP40,Triton X-100等
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