雙熒光素酶實驗通常用于以下研究方向:驗證miR同mRNA靶向互作。將待測mRNA的預(yù)測靶向序列插入報告基因載體,再共轉(zhuǎn)入該miRmimics,如果熒光素酶活性下降,則提示為其靶序列。驗證miR同lncRNA靶向互作。將候選的lncRNA預(yù)測靶向序列插入報告基因載體中F-Luc的3’UTR區(qū)域,檢測熒光素活性。啟動子結(jié)構(gòu)分析。將啟動子區(qū)域序列(通常2k左右)進(jìn)行分段截短,或?qū)μ囟ㄎ稽c進(jìn)行突變,再分別構(gòu)建入luciferase報告載體中替換啟動子序列,檢測其啟動子活性。驗證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用。雙熒光素酶實驗
將該序列(通常為啟動子區(qū)域)插入報告基因載體,同時在實驗細(xì)胞中共轉(zhuǎn)過表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子,可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)是否提高熒光素酶活性。細(xì)胞動物整體實驗
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