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天津組學實驗,雙熒光素酶實驗,qPCR,WB，細胞動物整體實驗
雙熒光素酶實驗的原理
將目的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控原件構(gòu)建入帶有熒光素酶(Firefly luciferase)的表達載體，構(gòu)建成報告基因質(zhì)粒，使這段序列調(diào)控luciferase的轉(zhuǎn)錄表達。然后將報告基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞，給予其不同的處理后裂解細胞，并加入底物熒光素(luciferin)，luciferase可催化luciferin發(fā)出熒光(波長在560nm左右)。檢測得到的熒光值高低可以判斷不同處理組對該轉(zhuǎn)錄調(diào)控原件的影響。為避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞時效率差異所造成的誤差，通常會轉(zhuǎn)入Renilla luciferase的報告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參(波長在465nm左右)，即雙熒光報告系統(tǒng)。
