Western Blot

簡介:

蛋白質(zhì)印跡的發(fā)明者一般認(rèn)為是美國斯坦福大學(xué)的喬治·斯塔克(George Stark)。在尼爾·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化學(xué)》(Analytical Biochemistry)中首次被稱為Western Blot。蛋白免疫印跡( Western Blot) 是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù),現(xiàn)己廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。

原理:

與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似,但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。

Western Blot顯色的方法主要有以下幾種:

i. 放射自顯影

ii. 底物化學(xué)發(fā)光ECL

iii. 底物熒光ECF

iv. 底物DAB呈色

現(xiàn)常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色,體同水平和實驗條件的是用第①種方法,發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL。只要買現(xiàn)成的試劑盒就行,操作也比較簡單,原理如下(二抗用HRP標(biāo)記):反應(yīng)底物為過氧化物+魯米諾,如遇到HRP,即發(fā)光,可使膠片曝光,就可洗出條帶。

服務(wù)內(nèi)容：

1)客戶提供蛋白的背景資料，包括蛋白的濃度、大小、是否膜蛋白，定性還是定量檢測等。

2)客戶提供一抗(標(biāo)明來源和稀釋度)，能同時提供陽性標(biāo)本，如果需定量分析，還需提供內(nèi)參抗體(亦可由我們提供)。

3)根據(jù)客戶提供的資料，我們對全部工作進行評估設(shè)計，簽訂技術(shù)服務(wù)合同。根據(jù)需要，我們可進行蛋白提取、電泳，轉(zhuǎn)膜、顯色、拍照等一系列操作。整套工作完成后，為客戶提供完整的試驗報告(包括實驗相關(guān)數(shù)據(jù)、數(shù)碼照片等)。

服務(wù)優(yōu)勢：

1）高質(zhì)量的產(chǎn)品支持:以國內(nèi)外知名公司的 Westem blot試劑盒及相關(guān)產(chǎn)品為支持，極大地提高檢測的靈敏度，且操作簡單快捷，可在短時間內(nèi)完成 Western blot檢測。

2）檢測靈敏度高:可檢測到低至 10-100 pg的目的蛋白。

3）整體化服務(wù): 免疫沉淀(IP)或免疫共沉淀 (Co-IP)和 Westen blot結(jié)合是研蛋白相互作用的有力工具，我們竭誠為您提供合理的實驗設(shè)計和優(yōu)質(zhì)的技術(shù)服務(wù)。

4）經(jīng)驗主富:本公司通過 Western方法檢測蛋白超過 500種。

服務(wù)價格：

詢價  13672155269（王康）